酶聯(lián)免疫分析儀(通常稱(chēng)為ELISA儀)是一種用于定量測(cè)定樣本中特定抗原或抗體的儀器,廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)和科研領(lǐng)域。以下是其測(cè)定步驟:
1.準(zhǔn)備試劑與樣本:
-根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,準(zhǔn)備相應(yīng)的酶標(biāo)試劑、底物、終止液等。
-收集并處理待測(cè)樣本,確保樣本符合實(shí)驗(yàn)要求。
2.設(shè)置實(shí)驗(yàn)參數(shù):
-打開(kāi)酶聯(lián)免疫分析儀,進(jìn)入操作界面。
-根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求,設(shè)置波長(zhǎng)、測(cè)量模式、反應(yīng)時(shí)間等參數(shù)。
3.加樣與反應(yīng):
-在酶標(biāo)板上按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)加入樣本、標(biāo)準(zhǔn)品及酶標(biāo)試劑。
-將酶標(biāo)板放入分析儀中,開(kāi)始反應(yīng)過(guò)程。
4.測(cè)量與讀數(shù):
-反應(yīng)結(jié)束后,分析儀會(huì)自動(dòng)測(cè)量各孔的光吸收值(OD值)。
-記錄或打印測(cè)量結(jié)果,進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
5.清洗與維護(hù):
-反應(yīng)結(jié)束后,取出酶標(biāo)板,清洗分析儀的測(cè)量部件。
-定期對(duì)分析儀進(jìn)行維護(hù)和校準(zhǔn),確保其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。
酶聯(lián)免疫分析儀的優(yōu)點(diǎn):
1.靈敏度高
-能夠檢測(cè)出極濃度的抗原或抗體。這是因?yàn)槊笜?biāo)記物的放大作用,一個(gè)抗原或抗體分子可以結(jié)合多個(gè)酶分子,而一個(gè)酶分子又可以催化多個(gè)底物分子產(chǎn)生大量的有色產(chǎn)物。例如,在檢測(cè)某些微量的蛋白質(zhì)激素(如胰島素)或病毒抗原(如乙肝病毒表面抗原)時(shí),它能夠檢測(cè)出每毫升納克甚至皮克級(jí)別的物質(zhì),比一些傳統(tǒng)的檢測(cè)方法(如直接凝集試驗(yàn))靈敏得多。
2.特異性強(qiáng)
-基于抗原 -抗體反應(yīng)的特異性,它只對(duì)特定的抗原或抗體進(jìn)行檢測(cè)。在復(fù)雜的生物樣本(如血液、尿液等)中,能夠準(zhǔn)確地識(shí)別出目標(biāo)物質(zhì),而不受其他物質(zhì)的干擾。例如,在檢測(cè)艾滋病病毒抗體時(shí),即使樣本中存在其他多種蛋白質(zhì)和微生物,它也能準(zhǔn)確地檢測(cè)出抗HIV抗體,為疾病的診斷提供可靠的依據(jù)。
3.準(zhǔn)確性好
-儀器采用標(biāo)準(zhǔn)化的操作流程和準(zhǔn)確的光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)。操作過(guò)程中,加樣量、反應(yīng)時(shí)間、溫度等條件都可以準(zhǔn)確控制。而且,通過(guò)內(nèi)部的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和質(zhì)量控制體系,可以對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行校準(zhǔn)和驗(yàn)證。例如,在臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室中,它可以對(duì)大量樣本進(jìn)行檢測(cè),并且保證每個(gè)樣本的檢測(cè)結(jié)果都具有較高的準(zhǔn)確性,誤差范圍通常可以控制在較小的范圍內(nèi),一般相對(duì)誤差在10以?xún)?nèi)。
4.可重復(fù)性佳
-對(duì)于相同的樣本,在不同的時(shí)間或不同的儀器上進(jìn)行檢測(cè),只要操作條件一致,其結(jié)果具有良好的重復(fù)性。這是因?yàn)樗臋z測(cè)原理和操作流程是相對(duì)穩(wěn)定的。例如,在藥物研發(fā)過(guò)程中,需要對(duì)同一批次的生物樣本進(jìn)行多次檢測(cè)來(lái)評(píng)估藥物效果,酶聯(lián)免疫分析儀能夠保證每次檢測(cè)的結(jié)果基本一致,從而為研究提供可靠的數(shù)據(jù)支持。
5.檢測(cè)速度快
-相比一些傳統(tǒng)的生物學(xué)檢測(cè)方法(如微生物培養(yǎng)法),酶聯(lián)免疫分析儀可以在較短的時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè)。一般來(lái)說(shuō),整個(gè)ELISA試驗(yàn)過(guò)程(包括加樣、反應(yīng)、洗滌和檢測(cè))可以在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)完成。例如,在急診檢驗(yàn)中,對(duì)于懷疑是心肌梗死患者的心肌損傷標(biāo)志物(如肌鈣蛋白)的檢測(cè),它可以快速給出結(jié)果,為醫(yī)生的診斷和治療爭(zhēng)取時(shí)間。